Riindirizzamento del citotropismo di un alfatogavirus in modo da causare l¿infezione ed uccisione selettiva delle cellule permanentemente infettate da HIV

Presupposti della ricerca Poiché HIV causa l'AIDS integrando il genoma in quello cellulare, la terapia HAART si è rivelata capace di prolungare la vita ma non di guarire i soggetti infettati. Per questo intendiamo costruire un virus chimerico ad azione citocida in grado di penetrare ed uccidere selettivamente cellule infettate latentemente dal virus HIV ed esprimenti i prodotti del gene env virale sulla loro superficie. Fasi metodologiche La sequenza di E2 responsabile del pantropismo del virus Sindbis verrà sostituita dai frammenti D1 e D1/D2 del CD4 umano contenenti il sito di legame della gp120 di HIV-1. I virus così ingegnerizzati dovrebbero acquisire un tropismo ristretto alle cellule gp120-positive. Il virus Sindbis possiede un genoma di 11.703 nucleotidi costituito da RNA ad elica singola a polarità positiva. Esso presenta le tipiche modificazioni in 5¿ e 3¿ degli mRNA cellulari e come tale si comporta replicando autonomamente nel citoplasma per mezzo di una propria RNA polimerasi RNA-dipendente. Per modificarlo geneticamente è stata perciò adottata una strategia basata su: 1- conversione del genoma virale da RNA a DNA e inserimento di quest¿ultimo in un plasmide a valle di un promotore in grado di legare l¿RNA polimerasi di un fago con genoma a doppio filamento di DNA; 2- modificazione genetica del genoma virale 3- trascrizione in vitro dell¿intero genoma 4- trasfezione dell¿mRNA in cellule bersaglio per la produzione di nuovi virus a tropismo selettivo per cellule env+. L¿ingegnerizzazione del virus Sindbis wt seguirà lo schema suddetto e già utilizzato con successo da altri gruppi che utilizzano alfavirus. Obiettivo finale E¿ rappresentato dall¿eliminazione selettiva delle cellule T infettate dal virus HIV che rappresentano i ¿santuari¿ del virus non eliminabili con nessuna terapia antivirale in quanto il genoma del retrovirus vi è stabilmente integrato.