Quantificazione del rapporto tra isoforme a e b della banda 4.1 per la stima dell'eta' cellulare negli eritrociti

E¿ noto che la vita media eritrocitaria e' di circa 120 giorni, ma pochi studi riportano quanto sia la sua variabilita' biologica. Il sesso, la gravidanza e diverse patologie possono ridurne od aumentarne la durata. Da un punto di vista metodologico la misura viene solitamente effettuata mediante procedure isotopiche, che sono soggette a notevoli fonti di variabilità, invasivita' e che portano come conseguenza la definizione di intervalli di riferimento molto ampli (70 ¿ 150 giorni). Un approccio innovativo potrebbe essere basato sull¿utilizzo degli orologi molecolari, cioe' sulla misura del grado di de-amidazione di alcuni residui di glutammina o di asparagina. Nel caso dei globuli rossi umani una proteina di membrana (la proteina 4.1) esiste in due isoforme principali che possono essere risolte elettroforeticamente e che si differenziano per il diverso grado di de-amidazione, ed il rapporto tra di esse e' stato proposto come indice di invecchiamento eritrocitario. Scopo di questa ricerca e' quindi quello di mettere a punto un metodo rapido, riproducibile ed accurato per la misura del rapporto 4.1a/4.1b e di validare tale metodica in una casistica selezionata. A tal fine si procedera' a purificare una quantità sufficiente (30-50 nmoli) di proteina 4.1, ottimizzare la separazione delle due isoforme mediante elettroforesi capillare, quantificare i rapporti tra peptidi specifici con tecniche proteomiche, calibrare la metodica in sottopopolazioni eritrocitarie di eta' definita separate per gradienti di densita'. La misura dell¿emivita eritrocitaria sara' applicata allo studio di un gruppo di soggetti diabetici (di tipo 1 e 2) al fine di valutare se essa si differenzia rispetto ai soggetti in buono stato di salute, come preliminarmente segnalato da alcuni autori. Tale dato potrebbe essere poi utilizzato per ricercare quali possano essere le possibili cause della rimozione precoce degli eritrociti in presenza di diabete.