Structure-function studies on 24-dehydrocholesterol reductase, the affected enzyme in desmosterolosis, a severe inherited disorder of sterol metabolism

Seladin1/DHCR24, la putatica 24 deidrocolesterolo riduttasi. E' stato dimost5rato che mutazioni del gene DHCR24 sono associate alla desmosterolosi, una rara ma grave malattia ereditaria. Capire come queste mutazioni causino la malattia richiede la delucidazione delle reali attivita' catalitiche della DHCR24 che si propone partecipare alla biosintesi del colesterolo catalizzando la riduzione NADPH-dipendente del desmosterolo (e altri precursori insaturi nella posizione 24-25) a dare colesterolo (e i precursori saturi alla posizione 24-25). Per raggiungere questo obbiettivo ci siamo proposti di ottenere preparazioni di forme attive della DHCR24 umana, che e' proposta essere associata alla membrana del reticolo endoplasmico attraverso una regione N-terminale che precede la regione catalitica, per la successiva caratterizzazione in vitro. Tentativi di produzione della proteina in E. coli non hanno dato risultati soddisfacenti, mentre recenti prove di espressione nel lievito Pichia pastori (in collaborazione con la TU Graz, Austria) sono molto promettenti. Parallelamente, in collaborazione con i Prof. Maggi, Galbiati e caruso (UniMI) si sta anche studiando l'effetto dell'espressione dei mutanti che ricapitolano la desmosterolosi e della localizzazione intracellulare della DHCR24 in cellule di mammifero di origine neuronale scelte come modello di neuroni immaturi.