Identificazione e caratterizzazione di cellule tumorali circolanti (CTC) in pazienti sottoposti a chirurgia curativa per carcinoma del retto.

Background- L'identificazione di CTC nel sangue periferico (SP) in pazienti sottoposti a chirurgia colorettale per neoplasia rappresenta un fattore di grande interesse prognostico e terapeutico che tuttavia necessita di ulteriore validazione (Uen YH et al. 2008). A questo scopo abbiamo messo a punto un protocollo integrato di ricerca e monitoraggio di CTC in pazienti con carcinoma del retto (CR) localmente avanzato candidati a chirurgia radicale dopo terapia neoadiuvante con l'obiettivo di definire: - parametri analitici della ricerca di CTC nel SP - il valore prognostico delle CTC secondo indicatori di sopravvivenza - il valore di campionamenti seriati durante il trattamento per la strategia terapeutica Ci proponiamo inoltre di caratterizzare le CTC dal punto di vista Bio-molecolare al fine di investigare: - la presenza di sottopopolazioni cellulari nell'ambito delle CTC - il profilo di espressione delle CTC e l'identificazione di nuovi target molecolari - la staminalità e la sua rilevanza prognostica per la malattia metastatica delle sottopopolazione identificate. Metodi- Verranno arruolati 80 pazienti candidati a chirurgia radicale per CR afferenti alla Divisione di Chirurgia Generale e Laparoscopica dell'Istituto Europeo di Oncologia. Terapie multimodali (CT e RT) verrano effettuate nella nostra Istituzione. I dati raccolti verranno inserite da personale dedicato in uno specifico Database. Lo studio sarà approvato dal comitato etico dell'IEO e la partecipazione sottoposta ad un consenso informato scritto. I campioni di SP verranno conservati presso la nostra Emoteca e raccolti secondo lo schema seguente: 1) t0: precedente alla terapia neoadiuvante 2) t1: post neoadiuvante-pre chirurgia 3) t2: post chirurgia-preadiuvante 4) t3: post adiuvante 5) tn: follow-up I saggi verranno eseguiti in cieco attraverso un sistema automatizzato (Veridex, USA) che analizza la presenza di cellule nucleate CD45 negative che esprimono citocheratine. La caratterizzazione molecolare e l'allestimento di colture cellulari da CTC tessuti bioptici verrà effettuata presso i laboratori dell'IFOM IEO campus. In particolare verranno analizzate eventuali sottopopolazioni cellulari con caratteristiche di staminalità o maggiore potenziale metastatico. Risultati attesi- Questo progetto permetterà una migliore definizione del ruolo prognostico delle CTC in pazienti con CR e del possibile utilizzo nel planning e nel monitoraggio di terapie neoadiuvanti e adiuvanti. Non ultimo, permetterà di caratterizzare queste cellule dal punto di vista biologico, permettendo la definizione di pathway molecolari responsabili della progressione di malattia, l'isolamento di sottopopolazioni specifiche e l'identificazione di nuovi biomarcatori.