Identificazione e caratterizzazione di cellule tumorali circolanti (CTC) in pazienti sottoposti a chirurgia curativa per carcinoma del retto.
Progetto Background- L'identificazione di CTC nel sangue periferico (SP) in pazienti sottoposti a chirurgia colorettale per
neoplasia rappresenta un fattore di grande interesse prognostico e terapeutico che tuttavia necessita di ulteriore
validazione (Uen YH et al. 2008). A questo scopo abbiamo messo a punto un protocollo integrato di ricerca e
monitoraggio di CTC in pazienti con carcinoma del retto (CR) localmente avanzato candidati a chirurgia radicale dopo
terapia neoadiuvante con l'obiettivo di definire:
- parametri analitici della ricerca di CTC nel SP
- il valore prognostico delle CTC secondo indicatori di sopravvivenza
- il valore di campionamenti seriati durante il trattamento per la strategia terapeutica
Ci proponiamo inoltre di caratterizzare le CTC dal punto di vista Bio-molecolare al fine di investigare:
- la presenza di sottopopolazioni cellulari nell'ambito delle CTC
- il profilo di espressione delle CTC e l'identificazione di nuovi target molecolari
- la staminalità e la sua rilevanza prognostica per la malattia metastatica delle sottopopolazione identificate.
Metodi- Verranno arruolati 80 pazienti candidati a chirurgia radicale per CR afferenti alla Divisione di Chirurgia
Generale e Laparoscopica dell'Istituto Europeo di Oncologia. Terapie multimodali (CT e RT) verrano effettuate nella
nostra Istituzione. I dati raccolti verranno inserite da personale dedicato in uno specifico Database. Lo studio sarà
approvato dal comitato etico dell'IEO e la partecipazione sottoposta ad un consenso informato scritto. I campioni di
SP verranno conservati presso la nostra Emoteca e raccolti secondo lo schema seguente:
1) t0: precedente alla terapia neoadiuvante
2) t1: post neoadiuvante-pre chirurgia
3) t2: post chirurgia-preadiuvante
4) t3: post adiuvante
5) tn: follow-up
I saggi verranno eseguiti in cieco attraverso un sistema automatizzato (Veridex, USA) che analizza la presenza di
cellule nucleate CD45 negative che esprimono citocheratine. La caratterizzazione molecolare e l'allestimento di
colture cellulari da CTC tessuti bioptici verrà effettuata presso i laboratori dell'IFOM IEO campus. In particolare
verranno analizzate eventuali sottopopolazioni cellulari con caratteristiche di staminalità o maggiore potenziale
metastatico.
Risultati attesi- Questo progetto permetterà una migliore definizione del ruolo prognostico delle CTC in pazienti con
CR e del possibile utilizzo nel planning e nel monitoraggio di terapie neoadiuvanti e adiuvanti. Non ultimo, permetterà
di caratterizzare queste cellule dal punto di vista biologico, permettendo la definizione di pathway molecolari
responsabili della progressione di malattia, l'isolamento di sottopopolazioni specifiche e l'identificazione di nuovi
biomarcatori.