Presupposti. La nefrolitiasi calcica è una malattia complessa, causata dall'interazione di fattori genetici e ambientali tra cui principalmente le abitudini alimentari. I nostri studi hanno considerato diversi geni candidato e tra essi il gene del recettore sensibile al calcio (CaSR) ha dato risultati positivi. Abbiamo mappato l’intero gene CaSR mediante marcatori posti a distanza di 5-kb l’uno dall’altro per trovare l’associazione con la calcolosi. E’ stato trovato che gli alleli minori degli SNP del tratto 5’UTR (rs7652589, rs4678013, rs1501899) erano più frequenti nei pazienti con calcolosi.
Scopi del progetto
1. Identificare i geni che causano nefrolitiasi calcica
2. Identificare i nutrienti che favoriscono la produzione di calcoli.
3. Trovare indici che definiscono la suscettibilità alla calcolosi.
4. Definire il ruolo del gene del CaSR nella litogenesi.
5. Chiarire la patogenesi della nefrolitiasi calcica.
In funzione di questi scopi, il progetto si sviluppa con i seguenti obiettivi specifici:
1. Valutare il ruolo degli SNP associati alla calcolosi calcica.
2. Identificare gli aplotipi associati ai calcoli renali.
3. Identificare gli SNP associati a calcolosi e a specifici fenotipi (ipercalciuria, iperossaluria, ipocitraturia …).
4. Valutare l’interazione tra geni nello sviluppo di calcolosi.
5. Valutare la relazione tra espressione del CaSR e aplotipo correlato a calcolosi.
6. Definire le caratteristiche della dieta nei pazienti calcolotici.
7. Valutare l’interazione tra nutrienti e geni nello sviluppo della calcolosi.
8. Sviluppare questi scopi con specifico riferimento al CaSR.
Disegno dello studio in relazione a questi 8 obiettivi.
Obiettivi 1, 2, 3: strategia del gene-candidato applicata ad uno studio di associazione genotipo-fenotipo con un disegno caso-controllo e, dopo avere ottenuto un campione sufficiente, un disegno familiare.
Obiettivo 4: disegno caso-controllo per valutare l’associazione genotipo-fenotipo negli individui con specifici genotipi in altri loci.
Obiettivo 5: valutazione delle differenze di espressione del CaSR nelle cellule tubulari dei soggetti portatori dei diversi aplotipi del gene CaSR, misurando mRNA e proteina nelle cellule; studio dei siti di legame di fattori di trascrizione nella regione dei promotori del gene del CaSR.
Obiettivo 6: studio nutrizionale caso-controllo.
Obiettivo 7: studio di associazione tra genotipi del CaSR e caratteristiche nutrizionali.
Obiettivo 8: studi di associazione con disegno caso controllo o familiare per valutare i citati obiettivi 2, 3, 4, 7 in relazione al gene CaSR.
Strumenti già disponibili
banca di DNA di campioni di 750 pazienti e 750 controlli, paragonabili per sesso ed età, e 200 parenti di primo grado dei probandi.
database di fenotipi e genotipi, inclusi quelli degli SNP già tipizzati in questi soggetti.
database nutrizionale di 200 pazienti e 100 controlli
banca di RNA estratti da rene umano (n=100)