Applicazione della PCR multiplex e Real Time PCR per la determinazione quali-quantitativa di batteri tipici, atipici e virus responsabili di infezioni delle alte vie respiratorie
Progetto Le infezioni rappresentano uno dei principali motivi di richiesta di intervento medico nei paesi industrializzati. L'utilizzo di antibiotici è ampiamente diffuso nonostante in molti casi non si conosca la reale eziologia dell'infezione. Questo consumo non giustificato è in parte responsabile della diffusione incontrollata di fenomeni di resistenza agli antibiotici. La valutazione della reale incidenza di infezioni batteriche e di infezioni virali può pertanto contribuire all'utilizzo di terapie adeguate. La conoscenza dell'epidemiologia virale è rimasta tuttavia per anni limitata, a causa della scarsa disponibilità di metodologie dotate della sufficiente sensibilità e specificità necessari. Allo stesso modo, lo studio del ruolo dei batteri in queste infezioni è stato determinato utilizzando prevalentemente metodi colturali, che pertanto non hanno permesso, se non in pochi casi, lo studio di batteri atipici. Recentemente lo sviluppo di metodi molecolari ha portato alla rivalutazione del ruolo di virus e batteri atipici in diverse patologie, comprese quelle respiratorie. Nel nostro laboratorio negli ultimi anni è stato intrapreso un progetto per la valutazione dell'applicazione di tali metodi per lo studio dell'eziologia virale e batterica di patologie delle alte vie respiratorie. Nei primi anni in particolare è stata studiata la presenza di virus respiratori e di batteri atipici in patologie delle alte vie aeree associate alla necessità di interventi di adenoidectomia e/o tonsillectomia in pazienti pediatrici, evidenziando la frequente presenza di alcune specie virali in tali pazienti, e il ruolo limitato dei batteri atipici. Nello stesso modo è stata successivamente valutata l'importanza di questi microorganismi nell'eziologia di riacutizzazione di episodi di bronchite cronica ostruttiva.
La continuazione di questo progetto prevede ora l'allargamento dello studio alla valutazione di un più elevato numero di virus in tonsille di soggetti adulti per valutarne il ruolo in patologie croniche richiedenti la loro rimozione. A tal fine, in una prima fase verrà utilizzata una PCR multiplex che permette la rivelazione degli acidi nucleici di 11 virus quali Influenza A, Influenza B, Adenovirus, Parainfluenza virus 1, Parainfluenza virus 2, Parainfluenza virus 3, Virus respiratorio sinciziale A, Virus respiratorio sinciziale B, Rinovirus A, Coronavirus OC43, Coronavirus 229E/NL63. Nella seconda fase i risultati ottenuti verranno confrontati utilizzando la Real Time PCR con una metodica già validata nel nostro Laboratorio.