BACKGROUND La nefrolitiasi calcica idiopatica (ICN) si sviluppa da un substrato genetico interagente con fattori ambientali.
La strategia per lo studio di una malattia complessa come la ICN è stata:
1) raccolta di un campione numeroso di casi e controlli: sono stati reclutati 555 controlli e 675 pz ICN.
2) studio di fenotipi intermedi per individuare sottogruppi di pz: i soggetti sono stati sottoposti ad anamnesi, dosaggi ematici di elettroliti e PTH e dosaggio nelle urine di 24 ore di Na, K, Ca, P, Mg, Cl, Ox, urato, citrato, creatinina, urea.
3) definizione dell¿aplotipo di geni associati alla ICN: dai nostri studi è emerso che l¿aplotipo del primo blocco del gene CaSR è associato alla ICN. Tre SNPs nel primo blocco aplotipico sono risultate avere una frequenza diversa nei calcolotici rispetto ai controlli (rs765289 33% vs 29%, p=0.019; rs4678013, 17.5% vs 14.7%, p=0.048, rs1501899 33% vs 27%, p=0.002; chi2 test).
4) analisi della dieta dei pz come determinante della ICN: L'indagine alimentare condotta su 196 controlli e 232 calcolotici è stata di tipo quantitativo con diari dietetici per 3 giorni, e di tipo qualitativo con questionari di frequenza su 6 mesi.
OBIETTIVO GENERALE Lo studio si propone di individuare i geni che si associano alla ICN con un possibile ruolo causale, con particolare attenzione alle interazioni con determinanti nutrizionali. Lo scopo è di ottenere markers di suscettibilità, potenzialmente utili sia per la prevenzione primaria della ICN, che per la profilassi delle recidive nei pz. ICN.
OBIETTIVI SPECIFICI 1) Sulla base dei precedenti risultati sul ruolo di CaSR nella ICN, sarà studiato l¿effetto funzionale delle varianti della regione 5¿UTR di CaSR. Essendo l¿aplotipo associato alla calcolosi nella zona dei promotori del gene del CaSR, ipotizziamo un diverso livello di espressione del recettore a seconda dell¿aplotipo. Il diverso livello di espressione influenzerebbe il riassorbimento di acqua che è sotto l¿influenza del CaSR nel tubulo renale e quindi la formazione di calcoli. 2) eseguire uno studio sull¿associazione tra aplotipi del CaSR, fenotipi e aspetti nutrizionali, che potrebbe permettere di dare indicazioni nutrizionali mirate per soggetti con diversi aplotipi.
METODOLOGIA 1) Misurazione mediante RT PCR dell¿mRNA e mediante Western blot dell¿espressione della proteina CaSR: a) nelle cellule renali del sedimento urinario, caratterizzate con immunoistochimica e cresciute in vitro b) nelle cellule tubulari renali da biopsie renali. Confronto dei risultati di espressione rispetto all¿aplotipo. Abbiamo a questo scopo già raccolto e genotipizzato oltre 60 biopsie e contiamo di arrivare a 100.
2) L¿analisi nutrizionale sarà effettuata con i softwares Winfood e Dietosystem (DS Medica-Milano) e saranno paragonati i risultati ottenuti dai soggetti normali con quelli dei pz ICN. Saranno inoltre correlati i dati genetici, fenotipici e nutrizionali.