Studio dell'espressione genica di enzimi epatici in funzione della somministrazione di acidi grassi a bovine da latte

Nel periodo del periparto le bovine da latte subiscono drastici cambiamenti dell'assetto metabolico e della funzionalità epatica, in particolar modo il metabolismo lipidico deve adattarsi alla lattazione. La formazione di trigliceridi ed i fenomeni di beta-ossidazione mitocondriale e perossisomiale a livello epatico sono modulati dall'attivazione dei PPARalfa (proxisome proliferator-activated receptor alfa). I PPARalfa svolgono un ruolo fondamentale nel mantenere il livello costitutivo di beta-ossidazione mitocondriale. Tali recettori sono influenzati dai livelli nutritivi di alcune sostanze della dieta: EPA e DHA tra gli acidi grassi polinsaturi, e l'acido palmitico tra i saturi, sono ligandi naturali dei PPARalfa tra i più efficaci nel modularne i livelli di espressione Obiettivo: Si studieranno gli effetti della somministrazione di acidi grassi omega 3 e vit.E su: 1. Metabolismo lipidico epatico con uno studio di nutrigenomica 2. composizione in acidi grassi del sangue, colostro e del latte Disegno sperimentale: Si formeranno due gruppi di soggetti: controllo (C) (10 animali) e trattato (O3) (10 animali). Il trattamento consiste nella somministrazione di olio di pesce ricco di acidi grassi omega 3 (O3). Parametri Verranno valutate la BCS, la produzione e le caratteristiche del latte. Sui campioni di colostro e di latte prelevati a 2, 7, 15, 28 giorni dopo il parto si procederà all¿analisi del profilo acidico ed alla determinazione dell'attività della Delta9 desaturasi come: (prodotti della Delta9 desaturasi)/(prodotti della Delta9 desaturasi+ substati della Delta9 desaturasi). Saranno effettuati prelievi ematici ai giorni 15, 7 e 2 giorni prima del parto, e a 2, 7, 15 dopo il parto; questi campioni saranno utilizzati per la determinazione del contenuto di glucosio, acidi grassi non esterificati (NEFA), beta-idrossibutirrato (BHBA), urea, AST/GOT, GGT, calcio e acidi grassi. Biopsie epatiche Al fine di valutare l'attività dei PPAR-alfa verranno effettuate biopsie epatiche a 15 e 2 giorni prima e 2 e 15 giorni dopo il parto attraverso l'impiego di un ago bioptico 14G che verrà introdotto nell'incisione praticata all¿altezza dell'undicesimo spazio intercostale, 10 cm al di sotto della colonna vertebrale rintracciando il punto di repere tramite percussione . I campioni ottenuti varranno conservati a -80°C e successivamente analizzati mediante l'impiego di RT-PCR per la determinazione del contenuto di mRNA per PPAR-alfa;, e ACSL, ACADVL e CPT1A (codificanti rispettivamente per l'acil-CoA sintetasi, acil-CoA deidrogenase a catena molto lunga e la carnitin-palmitoil transferasi 1) in qualità di principali geni sotto controllo diretto del'attività dei PPAR-alfa. Inoltre un' aliquota dei medesimi campioni bioptici sarà utilizzata per determinare il contenuto di lipidi totali e trigliceridi. Si otterranno quindi informazioni sul ruolo degli acidi grassi omega 3 nella modulazione del metabolismo lipidico intorno al parto.