Si è mostrato che la stimolazione dei recettori beta-adrenergici aumenta l'assorbimento di liquido al seguito del trasporto attivo di soluti da parte del mesotelio pleurico di coniglio. Inoltre, questi recettori sono stimolati quando la concentrazione proteica del liquido pleurico diminuisce. Il primo scopo di questa ricerca sarà pertanto l'identificazione molecolare di questi recettori nel mesotelio pleurico di coniglio. Questa sarà ottenuta con saggi di Western Blot sulle proteine totali estratte dalle cellule mesoteliali prelevate per raschiamento dalla pleura viscerale o parietale.
Inoltre, è stato mostrato da altri che la concentrazione di adenosintrifosfato (ATP, o di adenosina), tramite recettori purinergici, interviene nella regolazione dello spessore dello strato di liquido presente sulla superficie delle vie aeree, nonostante la concentrazione di ATP in detto liquido sia soltanto nanomolare. La concentrazione di ATP potrebbe intervenire anche nella regolazione del volume e della composizione del liquido pleurico. Secondo scopo della presente ricerca sarà pertanto l'identificazione molecolare di recettori purinergici nel mesotelio pleurico di coniglio mediante tecnica di Western-blot. In caso positivo, si procederà alla terza fase della ricerca: la determinazione della concentrazione di ATP nel liquido pleurico di conigli anestetizzati. Dato che la concentrazione di ATP nel liquido extracellulare è soltanto nanomolare, essa verrà determinata con un luminometro, sensibile a concentrazioni di ATP fentomolari. Poiché il prelievo di liquido pleurico comporta un danno a qualche cellula del mesotelio e la concentrazione intracellulare di ATP è ~ un milione di volte quella extracellulare, occorre dapprima misurare l'artefatto da prelievo. A tal fine si misurerà la concentrazione di ATP nel liquido pleurico dopo l'introduzione di varie cannule nel cavo. Dalla relazione tra concentrazione di ATP e numero di cannule introdotte si potrà estrapolare la concentrazione di ATP nel liquido in assenza di cannula. Se la varianza di questo valore fosse elevata si allestiranno colture cellulari di mesotelio pleurico di coniglio e si misurerà la concentrazione di ATP nel liquido di coltura (cioè in assenza di artefatto da prelievo). Una volta stabilita la concentrazione di ATP nel liquido pleurico di conigli di controllo, si determinerà se questa cambia significativamente in alcune condizioni sperimentali: iperventilazione da ipercapnia o da stimolazione degli arti, ventilazione artificiale, alterata concentrazione proteica del liquido pleurico, stimolazione dei recettori beta-adrenergici. Se in qualcuna di queste condizioni si verificherà una variazione significativa della concentrazione di ATP nel liquido, si determinerà se questa è accompagnata da una variazione nella velocità netta di assorbimento di liquido dal cavo pleurico mediante la tecnica più volte usata in vivo per determinare l'assorbimento di liquido al seguito del trasporto di soluti.