Studio dell'espressione di alcune citochine pro-infiammatorie nel tessuto adiposo epicardio in vivo ed in vitro

Presupposti Il tessuto adiposo viscerale (VAT) viene oggi considerato un organo endocrino capace di produrre e secernere molecole proinfiammatorie come IL-6, TNF-a ed MCP-1 causando uno stato di infiammazione lieve. E' del tutto recente la possibilità di quantificare il tessuto adiposo epicardio mediante studio ecocardiografico; esso risulta strettamente correlabile al VAT ed è stato recentemente dimostrato in grado di secernere diverse molecole proinfiammatorie: questo potrebbe contribuire a determinare un ambiente infiammatorio in grado di influenzare la morfologia e la funzionalità cardiaca. Descrizione Campioni di tessuto adiposo epicardico e di tessuto adiposo sottocutaneo (0.5-1 g, a livello dell'arteria coronaria di destra e dal tessuto prossimale la vena safena nella gamba, rispettivamente) verranno prelevati prima di iniziare il bypass cardiopolmonare in pazienti affetti da malattia coronarica ed obesità. Lo studio interesserà circa n.30 pazienti. Verranno analizzate le citochine proinfiammatorie quali IL-6 , CD45 (?), CT-1, Visfatina e MCP-1. Verranno analizzate le funzionalità epatiche e renali attraverso esami di routine. Si doseranno i parametri infiammatori di fase acuta (VES e hs-CRP). In particolare verranno svolti degli Studi Pre-clinici: 1. Tessuti (VAT e SAT): estrazione di RNA , ed analisi con RT-PCR per espressione di citochine; con Real Time PCR quantificheremo l'espressione del gene per le citochine , se espresse. 2. Sangue (plasma EDTA): dosaggio citochine con metodica ELISA e dosaggi ematochimici di routine, (buffy coat) separazione delle cellule e analisi cellulare con citometria a flusso. 3. Tessuti per analisi istochimica 4. Tessuto (ca. 2 mm3) coltivato in piastra a 12-well. Dosaggio del surnatante con ELISA delle citochine pro-infiammatorie e di alcune adipocitochine. 5. Colture primarie da prelievo di tessuto epicardio : adipociti e monociti/macrofagi. Digestione del tessuto con collagenasi e separazione con beads delle cellule, ed analisi al citofluorimetro. Obiettivo della Ricerca Lo studio proposto intende chiarire l¿eventuale espressione di molecole infiammatorie nel tessuto adiposo epicardico [VAT] e relazionare tale eventuale espressione al tessuto adiposo sottocutaneo[SAT] ( prossimale alla vena safena).