ANTICORPI ETEROFILI NEL PLASMA ANIMALE: CARATTERIZZAZIONE E MECCANISMI DI INTERFERENZA NEI TEST IMMUNOCHIMICI IN BIOCHIMICA CLINICA VETERINARIA

Gli anticorpi eterofili (HAs) sono anticorpi anti-anticorpi di animali che si sviluppano nel plasma per cause quasi sempre ignote. Gli HAs presenti nei campioni di plasma o siero si legano alle immunoglobuline (Ig) di topo, coniglio, pecora o capra comunemente usate come reagenti nei dosaggi immunochimici e possono causare significativi errori analitici. La natura e il meccanismo molecolare con cui provocano interferenza sono problemi non risolti in medicina umana e ancora pochissimo studiati in medicina veterinaria. Recentemente abbiamo dimostrato che nel siero di alcuni cavalli sono presenti HAs e che questi sono responsabili di determinazioni falsamente alte della concentrazione dell¿ormone della crescita (GH) misurata con un metodo ELISA sandwich, che usa un monolconale di topo come primo anticorpo e policlonali di coniglio marcati. Il presente progetto di ricerca si propone di proseguire il lavoro intrapreso con l¿obbiettivo specifico di studiare le caratteristiche molecolari degli HAs nel cavallo e il meccanismo con cui gli HAs causano un errore nel dosaggio del GH e più in generale di dare un supporto teorico e pratico per risolvere il problema dei falsi risultati nelle analisi biochimico cliniche, sierologiche e tossicologiche in medicina veterinaria. Gli obbiettivi e i risultati attesi del progetto sono: 1) purificare gli HAs dal plasma di cavallo con cromatografia di immunoaffinità su colonna con immobilizzati anticorpi di coniglio o di topo; 2) verificare l¿attività degli HAs purificati come interferenti nel test ELISA per il GH; 3) caratterizzare la natura e l¿isotipo degli HAs purificati in SDS-elettroforesi, ELISA e western blott con anticorpi-anti anticorpi di cavallo; 4) caratterizzare la specificità antigenica degli HAs purificati, in particolare la specie-specificità e l¿attività anti-isotipo o anti-idiotipo utilizzando Ig e frammenti di Ig (Fc, Fab e Fab2) di diverse specie animali; 5) dati preliminari indicano una natura policonale degli HAs, quindi si prevede di separare le Ig purificate in base alla diversa affinità degli isotipi con le proteine A e G; 6) gli HAs così frazionati e purificati saranno impiegati in tests ELISA per studiare il meccanismo con cui le diverse classi di HAs interferiscono nell'interazione Ab-Ag nei test immunochimici.