Gli oppiacei sono gli analgesici di scelta per il dolore da moderato a severo. Per molti gli anni l'uso degli oppiacei è stato limitato al dolore da cancro nelle fasi terminali della vita. Ora si è iniziato ad utilizzarli anche in pazienti più giovani nel trattamento del dolore non da cancro. Una buona conoscenza degli effetti farmacologici di morfina è ancora più essenziale. Recentemente molti studi, anche del nostro gruppo, hanno indicato come morfina interagisca con il sistema immunitario, modulando l'immunità innata e acquisita.
Il meccanismo dell' immunomodulazione di morfina non è ancora del tutto noto. Avevamo dimostrato che il macrofago è un target importante per morfina, che ne riduce la risposta a stimoli infiammatori e la sintesi di IL-12, IL-1 e TNF. Abbiamo inoltre dimostrato che morfina diminuisce le citochine interagendo con il fattore di trascrizione NF-kB. Ora ci proponiamo di valutare l'effetto di morfina a monte di NF-kB, analizzando una sua interazione con i Toll Like Receptor(TLR).I TLR sono una famiglia di proteine di membrana che sono recettori di riconoscimento per molecole microbiche e che stimolano l'immunità innata.Il principale fattore di trascrizione attivato da TLR è proprio NFkB. Si può ipotizzare che gli effetti di morfina sulle citochine siano mediati da una alterazione dei TLR. Studieremo il TLR4, che è il sito di legame per lipopolisaccaride(LPS).Lo studio sarà condotto sia in vitro, su una linea di macrofagi murini (RAW 264.7)sia in vivo con colture primarie di macrofagi peritoneali murini. Negli esperimenti in vitro morfina verrà aggiunta alle concentrazioni 10microM a 1 nM , alle quali diminuisce le citochine. In vivo, i topi verranno trattati con 5 mg/Kg di morfina;si prelevano le cellule peritoneali, i macrofagi sono purificati e utilizzati per la valutazione del TLR. Gli studi verranno condotti con e senza LPS.
I TLR sono valutati con varie metodiche. Per studiarne l'espressione sulla membrana le cellule verranno analizzate in citofluorimetria con anticorpi per il TLR4 murino. La produzione di TLR4 verrà valutata attraverso l'analisi dei livelli di mRNA con real-time PCR. Se in questi primi esperimenti osserveremo delle variazioni del TLR4 dopo morfina, cercheremo di identificare il ruolo del recettore per gli oppioidi. Gli esperimenti saranno ripetuti con l'aggiunta del naloxone,antagonista del recettore MOR. Se l'effetto di morfina su TLR4 è mediato dal legame dell'oppiaceo al MOR, l'effetto su TLR4 dovrebbe scomparire, se invece questo non si osserva si devono considerare meccanismi non recettoriali o mediati da nuovi recettori per gli oppiacei. Lo studio porterà ad una migliore conoscenza degli effetti immunomodulatori di morfina, ormai osservati anche clinicamente. Considerando il ruolo fondamentale di TLR4 per la risposta innata , i risultati potrebbero spiegare l'elevata incidenza di patologie batteriche e virali presenti nei soggetti che abusano di oppiacei.