REGOLAZIONE TRASCRIZIONALE DELL¿ESPRESSIONE DEL RECETTORE DELLA TRASFERRINA MEDIANTE STIMOLI INFIAMMATORI E ANTI-INFIAMMATORI
Progetto Lo stato infiammatorio causa diverse modificazioni a carico dell¿omeostasi del ferro; tra queste, il sequestro di ferro all¿interno dei fagociti è una condizione che porta alla iposideremia e conseguente anemia da infiammazione cronica. Diversi stimoli infiammatori sono in grado di modulare il metabolismo del ferro, ma poco è noto sulla regolazione del suo metabolismo in seguito a segnali anti-infiammatori. A livello tissutale durante l¿ischemia e i processi infiammatori si accumula l¿adenosina, una molecola in grado di indurre tramite recettori specifici uno stimolo anti-infiammatorio. Abbiamo recentemente dimostrato che l¿adenosina è in grado di attivare il fattore di trascrizione HIF-1 in condizioni di normossia in una linea macrofagica murina, le J774A.1 (De Ponti, J. Leukoc. Biol. 2007, in press). HIF-1 è un fattore trascrizionale che in condizioni d¿ipossia, attiva la trascrizione di geni coinvolti nell¿angiogenesi, eritropoiesi, glicolisi, trasporto di ferro e proliferazione/sopravvivenza. HIF-1 è attivato anche da stimoli pro-infiammatori, quali LPS (Blouin, Blood 2004) in condizioni di normossia.
Dal momento che abbiamo dimostrato che il gene del Recettore della Trasferrina (TfR), la proteina che media l¿ingresso di ferro nelle cellule, è regolato da HIF-1 (Tacchini, J. Biol. Chem. 1999), lo scopo del nostro lavoro sarà quello di analizzare la regolazione del gene del TfR nella linea macrofagica J774A.1 in seguito a due stimoli, infiammatorio (LPS/IFNg) e anti-infiammatorio (CGS, agonista del recettore A2A dell¿adenosina), ambedue in grado di attivare il fattore trascrizionale HIF-1. Verrà inoltre studiata l¿espressione del TfR nelle J774A.1 pretrattate con CGS ed in seguito attivate da LPS/IFNg.
I livelli di TfR verranno analizzati a livello di mRNA e proteina in seguito ai diversi trattamenti, inoltre, per analizzare la regolazione trascrizionale del gene del TfR, verrà trasfettato il suo promotore normale e mutato nel sito di legame di HIF-1, posto a monte del gene reporter della luciferasi e misurata la sua attività.
I risultati attesi potranno fornire indicazioni sulle interazioni fra stimoli infiammatori e anti-infiammatori nel modulare la regolazione delle proteine coinvolte nel sequestro di ferro all¿interno del sistema reticolo endoteliale.
De Ponti C. et al. J. Leukoc. Biol. 2007 in press
Blouin C. et al. Blood 103:1124-1130, 2004
Tacchini L. et al. J. Biol. Chem. 274: 24142-24146, 1999