Studio di molecole coinvolte nei processi di segnalazione intracellulare e di invasione durante la transizione del carcinoma prostatico umano da androgeno-dipendente ad ormono-refrattario

PRESUPPOSTI: I meccanismi responsabili della progressione del cancro prostatico (CaP) da androgeno-responsivo ad ormono-refrattario (HRPC) sono ancor oggi poco conosciuti. Recenti studi hanno evidenziato che sia l¿aumento dei livelli di recettori tirosin chinasici EGFR/Her1 e HER-2/neu che la perdita del tumor suppressor gene PTEN sono associati allo sviluppo di HPRC. Anche la diminuizione di ERbeta, il recettore estrogenico prevalente nella prostata, sembra essere un prerequisito per il passaggio del CaP ad HRPC; è inoltre stato dimostrato che l'attivazione di ERbeta induce inibizione della proliferazione e della migrazione di alcuni modelli cellulari di CaP. La progressione del CaP è anche associata a cambiamenti di espressione o di attività di enzimi coinvolti nel rimodellamento della matrice extracellulare. Il sistema attivatore del plasminogeno (uPA, il recettore uPAR, gli inibitori PAI-1/PAI-2) è fortemente coinvolto nella progressione metastatica del CaP, controllando la proliferazione, l¿adesione e la migrazione cellulare; l'inibizione di questo sistema è accompagnata da regressione del potenziale invasivo. DESCRIZIONE: Per mimare la transizione clinica del CaP da androgeno-dipendente ad HRPC, saranno effettuati esperimenti sulla linea cellulare di carcinoma prostatico umano androgeno-sensibile CWR22R-2152. Queste cellule, se cronicamente trattate con diidrotestosterone (DHT, 10-12 M) o con l¿antiandrogeno bicalutamide (10 mM), generano rispettivamente cloni cellulari androgeno-independenti e androgeno-resistenti. In questi modelli cellulari, a vari tempi durante i trattamenti, si vuole valutare: 1) l¿espressione di EGFR/Her1, HER-2/neu e PTEN ed ERbeta attraverso tecniche di real-time PCR, immunoblotting ed immunocitochimiche; 2) l¿espressione e l¿attività di uPA, PAI-1/PAI-2 , unitamente ai livelli di espressione di uPAR, grazie ad analisi zimografiche, immunoblotting ed immunocitochimiche; 3) l¿effetto del trattamento con agonisti ERbeta selettivi sull'espressione e/o sull'attività di EGFR/Her1, HER-2/neu, PTEN, uPA, PAI-1/PAI-2, uPAR nelle cellule CWR22R-2152 durante la loro transizione a cellule androgeno-indipendenti ed androgeno-resistenti. Tali studi saranno effettuati grazie a tecniche di real-time PCR, immunoblotting, zimografiche ed immunocitochimiche. OBIETTIVI: I vari afferenti al gruppo di ricerca intendono chiarire, grazie alle loro specifiche competenze che verranno integrate durante l¿avanzamento del progetto, alcuni dei meccanismi cellulari e molecolari più rilevanti attraverso cui il CaP progredisce da androgeno-dipendente verso una patologia ormono-refrattaria.