Studio dell¿attività proapoptotica di aldeidi poliinsature su linee cellulari di carcinoma mammario.
Progetto Presso l¿università di Milano sono state sintetizzate originali molecole a struttura aldeidica poliinsatura (derivanti da studi sui pigmenti carotenoido-simili del piumaggio di volatili tropicali) aventi attività antiossidante (anti-ROS). Di questa serie strutturale, denominata parrodieni, in precedenti nostre esperienze si è stabilito che le molecole più attive sono l¿octanale con doppi legami coniugati in posizione 2, 4, 6 (octatrienale) ed il decanale 2, 4, 6, 8 (decatetraenale) (Drugs Exptl Clin Res 29, 95-100, 2003).
In una serie di test biologici, queste molecole hanno dimostrato altresì di possedere una potenziale attività antitumorale (Drugs Expltl Clin Res 30, 203 205, 2004).
E¿ noto che l¿aumento della ceramide è un indice di apoptosi cellulare e che i suoi livelli sono collegati alla crescita tumorale e ad altri fenomeni patologici.E¿ altresì noto che i livelli cellulari di ceramide ed altri sfingolipidi sono strettamente collegati alla formazione di ROS, sì che viene suggerito l¿uso di antiossidanti in terapie di patologie in cui sia coinvolta un¿alterazione del metabolismo degli sfingolipidi.
Si intende pertanto studiare l¿azione di potenti antiossidanti come l¿octatrienale ed il decatetraenale sulla crescita e sulla produzione di ceramide di due linee cellulari di carcinoma mammario.
In piastre a 96 pozzetti verranno lasciate crescere per 24 ore le cellule. In sei gruppi di 5 pozzetti si aggiungerà octatrienale o decatetraenale 10, 25, 50 ¿M rispettivamente; un settimo gruppo servirà da controllo non trattato. Dopo 2 e 5 giorni di incubazione verrà misurata la crescita cellulare (indice di proliferazione) tramite test alla Sulforodamina-B e lettura dell¿assorbanza a 540 nm.
Per la misura della produzione di ceramide si allestiranno altri sette gruppi di cinque pozzetti (controlli, octatrienale e decatetraenale 10, 25, 50 ¿M) che saranno lasciati ad incubare per 48h.
Si provvederà ad estrarre la frazione lipidica, indi un¿aliquota di 30nmol (determinata come fosfato inorganico) sarà incubata a temperatura ambiente con micelle di b-octylglucoside/dioleoyl phosphatidyl
glicerolo, dithiothreitolo 2mM, diacilglicerolo kinasi, 1 mM di ATP, 1.3¿Ci di ATP marcato con P32. Il tutto verrà portato al volume di 100¿l. Terminata la reazione, la frazione lipidica sarà estratta con opportuna miscela solvente in cromatografia a strato sottile. Le aree di P32-ceramide verranno infine visualizzate per autoradiografia, asportate e misurate al gamma-counter. I risultati ottenuti saranno analizzati statisticamente.