Regolazione della trascrizione nel metabolismo epatico e nelle cellule circolanti da parte di stimoli fisiologici e componenti della dieta
Progetto Linea 1 ¿ La dieta Mediterranea è associata ad un minor rischio cardiovascolare. La principale fonte di lipidi di questa dieta è l¿olio vergine d¿oliva, ricco di composti noti per la loro attività antiossidante. Studi precedenti hanno dimostrato che l¿estratto fenolico d¿olio vergine d¿oliva (VOO) inibisce l¿espressione di molecole d¿adesione in HUVEC attivate con TNF¿ e questa attività protettiva potrebbe essere estesa anche ad altre popolazioni cellulari coinvolte nello sviluppo di malattie cardiovascolari quali i monociti/macrofagi. In particolare, l¿interazione tra queste cellule e la matrice extracellulare induce l'espressione di metalloproteinasi-9 (MMP-9) che degradando la matrice extracellulare. Scopo della ricerca sarà di verificare l¿efficacia di VOOs sull¿espressione e attività della MMP9 in una linea cellulare di monociti/macrofagi (THP-1) mediante tecniche di RT-PCR e zimografia.
Linea 2 - Precedenti studi condotti presso il nostro laboratorio hanno evidenziato che alcune istone deacetilasi (HDAC) intervengono nella regolazione della colesterolo 7alfa-idrossilasi (CYP7A1), l'enzima limitante la conversione del colesterolo ad acidi biliari. L¿obiettivo di questa linea di ricerca è di definire le modalità attraverso le quali le HDAC regolano la trascrizione di CYP7A1. Questo obiettivo sarà perseguito valutando la localizzazione subcellulare delle HDAC coinvolte nella regolazione di CYP7A1 in epatociti trattati con acidi biliari e inibitori delle HDAC mediante microscopia a fluorescenza e confocale.
Linea 3 - I macrofagi a livello periferico e le cellule gliali a livello del SNC, svolgono un ruolo chiave sia nell¿omeostasi del colesterolo che nella risposta infiammatoria. Ci si propone di studiare l¿effetto di stimoli proinfiammatori e del carico di colesterolo sull¿espressione di geni chiave del metabolismo extraepatico del colesterolo. In particolare si valuterà l'espressione della sterolo 27-idrossilasi (mRNA e proteina), lo stato di attivazione di LXR (come induzione di geni bersaglio) ed il potenziale infiammatorio (espressione e rilascio di TNF-alfa) in cellule sottoposte a carico di colesterolo o a trattamento con LPS. Il potenziale ruolo di fattori di trascrizione attivati da LPS o dal colesterolo sull'attività del promotore della sterolo 27-idrossilasi sarà valutato mediante trasfezioni transienti.