Valutazione della presenza di autoanticorpi sierici anti integrine cheratinocitarie nei pazienti affetti da pemfigoide mucoso: significato biologico, correlazioni clinico-prognostiche e possibili applicazioni diagnostiche.
Progetto Il pemfigoide mucoso è una malattia autoimmune spesso misconosciuta e potenzialmente fatale, che colpisce diverse mucose dell¿organismo: mucosa congiuntivale, orale, laringea, e genitale. Nel siero di un terzo dei pazienti affetti da questa malattia sono stati dimostrati autoanticorpi rivolti contro molecole antigeniche di 180 e 230 kDa, localizzate a livello dei cheratinociti basali Tuttavia è ancora dibattuto il reale ruolo patogenetico di questi anticorpi e il loro significato clinico, il titolo autoanticorpale, infatti, non si correla al grado di attività della malattia né alla risposta terapeutica. Attualmente non sono ancora stati identificati markers sierologici per la diagnosi di quelle varietà cliniche ad andamento aggressivo e rapidamente evolutivo. Recentemente, alcuni autori hanno rilevato la presenza, nel siero di pazienti affetti da pemfigoide oculare, di anticorpi diretti contro la porzione citoplasmatica della integrina beta4.
Scopo della ricerca: identificare nel siero di pazienti affetti da pemfigoide orale e pemfigoide mucoso generalizzato l¿eventuale presenza di autoanticorpi anti integrine cheratinocitarie, in particolare anti-integrina Beta4, Alfa6, e Alfa3Beta1 , correlandola alle diverse modalità di estrinsecazione clinica e decorso della malattia.
Materiali e Metodi: nello studio verranno analizzati i sieri e campioni congelati di punch biopsie di pazienti affetti da pemfigoide mucoso con differenti coinvolgimenti mucosi. Verranno utilizzate metodiche di Immunofluorescenza diretta e immunofluorescenza indiretta su Na-split. L¿identificazione anticorpale verrà effettuata mediante metodiche di Immunoblot e Immunoprecipitazione condotte su estratti antigenici di colture cheratinociti e lisati di mucosa gengivale bovina. Verranno inoltre effettuati studi di assorbimento crociato con specifici anticorpi anti integrine Beta4, Alfa6, Alfa3Beta1,
Obiettivi specifici dello studio: 1)valutare la presenza di anticorpi anti integrina Beta4 nel siero di pazienti affetti da pemfigoide del cavo orale; 2) correlare il titolo anticorpale con l¿andamento clinico e la risposta alla terapia; 3) identificare e caratterizzare l¿eventuale presenza, in questi pazienti, di autoanticorpi diretti contro altre integrine cheratinocitarie;4) messa a punto di test sierologici di routine (ELISA) per la diagnosi delle diverse forme cliniche di pemfigoide mucoso