RAZIONALE: Gli ormoni steroidei giocano un ruolo fondamentale nella fisiologia del tessuto endometriale. Essi regolano i processi di crescita, differenziamento e rimodellamento caratteristici dell¿endometrio durante le fasi del ciclo mestruale e durante la gravidanza. Gli estrogeni tendono a regolare l¿attività proliferativa tipica della prima fase del ciclo mentre il progesterone conferisce all¿endometrio un fenotipo secretivo adatto all¿annidamento dell¿embrione. Classicamente, gli steroidi sono in grado di svolgere le proprie funzioni attraverso il legame con specifici recettori nucleari, i quali, una volta attivati, agiscono come fattori trascrizionali promuovendo la trascrizione genica. In aggiunta a tale meccanismo d¿azione che viene più comunemente definito ¿classico¿ o ¿genomico¿, gli ormoni steroidei sono risultati in grado di attivare rapidamente vie biochimiche alternative tipiche dei fattori di crescita [extracellular signal-regulated protein kinase (ERK)1/2, phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K), focal adhesion kinase (FAK)] secondo un meccanismo d¿azione definito come ¿non classico¿ o ¿non genomico¿. Studi recenti hanno di fatto evidenziato l¿esistenza di recettori di membrana tanto per estrogeni che per progesterone capaci di innescare meccanismi rapidi di fosforilazione di substrati che agiscono su una varietà di funzioni a carico di diverse popolazioni cellulari, soprattutto di natura neoplastica.
MATERIALI E METODI:
Campioni di endometrio umano saranno ottenuti in seguito ad interventi di laparoscopia per indicazioni ginecologiche benigne previo consenso infermato delle pazienti. Le colture cellulari saranno ottenute mediante dispersione enzimatica e verranno cresciute secondo procedure standard.
¿ Esperimenti di proliferazione, adesione e migrazione (usando un sistema di chemiotassi in camera di Boyden) verranno sottoposti a regolazione per tempi rapidi con diverse concentrazioni di steroidi e con specifici inibitori delle diverse vie biochimiche per evidenziarne l¿eventuale coinvolgimento.
¿ Per evidenziare l¿effetto diretto sull¿attivazione di specifiche kinasi ad opera degli ormoni steroidei, esperimenti di western blotting verranno eseguiti previa estrazione proteica di cellule trattate come precedentemente descritto, utilizzando anticorpi diretti contro le forme fosforilate e non degli enzimi coinvolti
OBIETTIVI: Scopo di questo studio sarà quello di capire quale significato abbia a livello dell¿endometrio fisiologico questo meccanismo d¿azione alternativo e a quali funzioni sottenda. In particolare, verrà verificata la possibilità che processi essenziali come la proliferazione, l¿adesione e la migrazione delle cellule endometriali possano essere sottoposti ad una regolazione di tipo ¿non classico¿ da parte degli ormoni steroidei ed, eventualmente, verranno identificate le vie biochimiche coinvolte.