Analisi quantitativa delle alterazioni dell'apoptosi nelle leucemie linfatiche croniche (LLC) mediante tecnologia "microfluidic cards".
Progetto INTRODUZIONE:
La valutazione del profilo di espressione genica con ¿microarray¿ può produrre una vasta mole di dati relativi a geni convolti nella biologia della cellula neoplastica utili per la comprensione dei processi di trasformazione e progressione neoplastica e di risposta tumorale alla terapia. Le basi molecolari della risposta alla terapia e la valutazione dell¿efficacia di nuove strategie terapeutiche antineoplastiche potrebbero risiedere in parte nella caratterizzazione molecolare dei difetti insiti in questo processo.
La LLC è una neoplasia linfoide B matura a decorso indolente, che si caratterizza per una ridotta attitudine cellulare all¿apoptosi, associata ad una variabile capacità proliferante. I dati relativi alla valutazione delle vie molecolari che regolano l¿apoptosi nelle LLC sono limitati e, solo per pochi geni, sono stati chiariti i ruoli chiave nella regolazione di questo processo cellulare. Scopo del presente studio è la valutazione del profilo d¿espressione di 92 geni coinvolti nel processo apoptotico alcuni dei quali già bersaglio di terapie molecolari in trials clinici d¿altre neoplasie ematologiche maligne.
MATERIALI E METODI: La casistica comprende 35 pazienti affetti da LLC e 30 soggetti sani.
Il materiale in esame è rappresentato da linfociti B maturi ottenuti dal sangue periferico dei pazienti mediante prelievo al momento della diagnosi, prima di ogni terapia e mediante donazione di sangue per i controlli. Le cellule linfoidi, previa separazione ed arricchimento ottenuto con l¿uso di biglie magnetiche coniugate con l¿anticorpo monoclonale anti-CD19, vengono conservate fino al momento dell¿analisi in azoto liquido.
La valutazione quantitativa dell'mRNA verrà eseguita con metodica real time RT-PCR e con tecnologia ¿microfluidic cards¿ sui campioni di materiale congelato, previa estrazione dell'mRNA.
L'analisi statistica sarà condotta con appropriato software.
OBIETTIVI: Valutazione quantitativa dell'RNA messaggero di 92 geni coinvolti nell¿apoptosi nei campioni non neoplastici di controllo e nei casi di LLC. Analisi e confronto dei risultati ottenuti. Valutazione del significato biologico dei risultati ottenuti e delle principali alterazioni geniche riscontrate nei pazienti affetti da LLC. Presentazione dei risultati a congressi e elaborazione di pubblicazioni scientifiche.