Creazione di omograft vascolari mediante uso di matrici biologiche acellulari di origine animale
Progetto Le valvole cardiache di origine animale trattate con glutaraldeide sono le bioprotesi più utilizzate in campo cardiovascolare. Sebbene i trattamenti con glutaraldeide rendono meno immunogenica la struttura biologica, è stato dimostrato come questo stimoli la deposizione di calcio, riducendone funzionalità e durata post-impianto della protesi. Una delle soluzioni a questo problema viene dall¿utilizzo di strutture vascolari animali decellularizzate che offrano una matrice extracellulare biologica, ancora attiva, su cui re-impiantare cellule del ricevente mediante tecniche di ingegneria tissutale. Il presente progetto è indirizzato alla valutazione di una tecnica di decellularizzazione di uno scaffold vascolare di origine animale e conseguente ricellularizzazione con cellule endoteliali di specie animale differente (xenoimpianto). Metodo: verranno utilizzati n° 40 scaffold di pecora della lunghezza di 4 cm. composti da arteria polmonare (compresa di lembi valvolari), prelevati in modo sterile immediatamente dopo macellazione. I prelievi verranno sottoposti a lavaggio in acqua distillata + antibiotico (enrofloxacina) a 4°C per 24 ore. Verranno conseguentemente immersi in una soluzione acquosa contenente Triton e Deossicolato di sodio a 4°C per 24 ore ed infine immersi, previo lavaggio con PBS, in una soluzione acquosa contenente RNasi + DNasi e mantenuti per 8 ore a 37°C. I prelievi verranno di conseguenza immersi in una soluzione di lavaggio di PBS per 48 ore. Alla fine delle procedure ogni prelievo verrà sottoposto, utilizzando una porzione di 1 mm., a esame istologico con metodo standard (EE) per la valutazione microscopica dell¿avvenuta decellularizzazione. Il restante scaffold verrà seminato mediante semina statica con cellule endoteliali porcine e introdotto in un bioreattore progettato ad hoc per l¿espansione dinamica dell¿endotelio per circa 3 settimane. Alla fine delle procedure gli scaffold verranno sottoposti a esame microscopico standard.