L'azione cardioprotettiva del resveratrolo:effetto sui fattori proadesivi del cuore ischemico isolato di ratto
Progetto Il resveratrolo possiede spiccata attività scavenger nei confronti di molti radicali derivati dall¿ossigeno ed ha dimostrato di prevenire i danni da ischemia del muscolo cardiaco con meccanismi che sembrano coinvolgere l¿ossido nitrico (NO). A livello vascolare NO agisce come inibitore endogeno di chemotassi, adesività ed attivazione della componente leucocitaria. La ricerca proposta vuole indagare il meccanismo NO-dipendente, in base al quale il resveratrolo inibisce gli agenti proadesivi generati nel miocardio ischemico perfuso di ratto. Da ratti anestetizzati verranno allestite preparazioni di cuore isolato, montate su apparato Langendorff e perfuse con tampone bicarbonato Krebs-Henseleit. 10 minuti dopo il raggiungimento dello stato stazionario della funzione cardiaca, si registreranno i parametri funzionali cardiaci basali. I muscoli cardiaci verranno quindi suddivisi random tra un gruppo controllo, un gruppo resveratrolo ed un gruppo resveratrolo+L-NAME (Nomega-nitro-L-arginina metilestere, inibitore non selettivo della NO-sintetasi). Si procederà a perfondere i cuori per 15 min in assenza (controlli) od in presenza di resveratrolo 10¿M o di resveratrolo 10¿M+L-NAME. Tutti i preparati saranno poi sottoposti ad ischemia per 30 min e successivamente riperfusi per 2 h. L¿effetto protettivo del resveratrolo ed il suo rapporto con la produzione di NO verranno valutati e discussi in base al monitoraggio della funzionalità ventricolare (pressione aortica, gittata cardiaca, pressione telediastolica ventr. sin., dP/dT, flusso aortico, flusso coronarico), misura delle dimensioni dell¿infarto (perfusione con tampone+trifenil tetrazolio, fissazione con paraformaldeide, scanner e misurazione come pixels), entità dell¿apoptosi cellulare (immunoistochimica TUNEL), ricerca delle molecole solubili pro-adesive nel perfusato (sVCAM-1, sE-selectin, sICAM-1), misura dello stress ossidativo mediante determinazione quantitativa della malonilaldeide nel perfusato (HPLC).