Caratterizzazione funzionale di L1L nello sviluppo dell¿embrione e nella germinazione di Arabidopsis
Progetto Nei vertebrati, il fattore trascrizionale NF-Y è un trimero composto da tre subunità A, B, C, ciascuna delle quali in Arabidopsis costituisce una sottofamiglia di 9-10 geni (1).
Leafy Cotyledon 1 (LEC1) è un fattore NF-YB di Arabidopsis espresso durante lo sviluppo dell¿embrione (2). I mutanti lec1 presentano un fenotipo pleiotropico, in quanto hanno un difetto nel sospensore e un blocco nello sviluppo dell¿embrione, una diversa distribuzione di amido, lipidi e corpi proteici, sono intolleranti all¿essiccamento e parzialmente vivipari. I semi immaturi pre-germinano, sono insensibili ad acido abscissico (ABA), tolleranti ad alte concentrazioni di glucosio e sviluppano plantule con tricomi sui cotiledoni.
Anche Leafy Cotyledon1-like (L1L) è un fattore NF-YB ed è espresso durante lo sviluppo dell¿embrione. Linee RNAi per L1L presentano il 30% di semi con embrioni bloccati a diversi stadi di sviluppo (3). Al contrario, il mutante knock-out l1l-3 da noi isolato non presenta difetti nello sviluppo embrionale né tricomi sui cotiledoni. Sebbene i semi l1l-3 non siano vivipari, i semi immaturi l1l-3 sono però insensibili all¿acido abscissico (ABA) e sono in grado di pre-germinare.
Per comprendere il ruolo di L1L nello sviluppo dell¿embrione e nella germinazione, ci proponiamo di analizzare/determinare
1) la distribuzione di amido, corpi lipidici e proteici negli embrioni l1l-3
2) la germinazione di l1l-3 in terreni ad alte concentrazioni di glucosio
3) i doppi mutanti lec1 l1l e altri mutanti lec
4) le interazioni di L1L e LEC1 con le altre subunità NF-Y tramite Two-Hybrid in lievito
5) l¿espressione di putativi geni target nel mutante l1l-3
6) il promotore minimo di L1L per l¿espressione nell¿embrione tramite fusioni GUS in piante transgeniche di Arabidopsis
7) i fattori trascrizionali che regolano L1L tramite saggio one-hybrid in lievito
1 Gusmaroli et al. GENE 283: 41-8, 2002
2.Lotan et al. Cell 93, 1195-205, 1998
3 Kwong et al. Plant Cell 15:5-18, 2003