Obiettivo specifico: utilizzo di inibitori della via biosintetica degli steroli per incrementare la sintesi di calcitriolo in colture cellulari di Solanum malacoxylon.
Da colture cellulari ottenute da foglie di Solanum malacoxylon sono stati estratti e identificati: 7- deidrocolesterolo (in calli cresciuti al buio), colesterolo, vitamina D3, e i suoi metaboliti idrossilati 25(OH)D3 e 1¿,25(OH)2D3 (o calcitriolo, ormone importante nella regolazione dell¿omeostasi calcio-fosfato nei mammiferi e utilizzato nella terapia di diverse patologie). La via metabolica di biosintesi del calcitriolo sembra quindi seguire nelle piante lo stesso percorso identificato negli animali: 7-deidrocolesterolo ¿ (reazione fotochimica) vitamina D3 ¿ 25(OH)D3 ¿1¿,25(OH)2D3. Il 7-deidrocolesterolo è precursore sia della vitamina D3 che del colesterolo. Colture cellulari di Solanum malacoxylon verranno incubate al buio in presenza di B15766, inibitore dell¿enzima 7-deidrocolesterolo riduttasi che catalizza la trasformazione di 7-deidrocolesterolo in colesterolo: si dovrebbe ottenere un maggiore accumulo di 7-deidrocolesterolo e quindi, dopo esposizione delle colture alla luce, un maggior flusso di metaboliti nella via metabolica della vitamina D3. Il B15766 verrà testato anche insieme a un inibitore di enzimi sterol metil-transferasi. Lo sterolo maggiormente presente nella membrane cellulari delle piante è infatti il ß-sitosterolo che si forma dal cicloartenolo in seguito a due successive C-metilazioni in posizione C-24 della catena laterale dello sterolo. Il cicloartenolo è precursore anche della via metabolica che porta a 7-deidrocolesterolo e colesterolo. Bloccando le metilazioni del cicloartenolo e contemporaneamente la riduzione del 7-deidrocolesterolo a colesterolo ci aspettiamo un maggior flusso di metaboliti indirizzato alla sintesi di calcitriolo. Per questo studio metabolico verranno utilizzate tecniche cromatografiche Gas-massa, HPLC-massa e test ELISA.