INDAGINI SUL RUOLO DI RAP1 NELLA REGOLAZIONE DELLA DINAMICA DI GIUNZIONE TRA CELLULE GERMINALI E CELLULE DEL SERTOLI
Progetto L¿infertilità maschile umana colpisce il 12% delle coppie. Al momento, i trattamenti per l¿infertilità sono limitati e spesso si ricorre a tecniche di fecondazione in vitro, IVF, ICSI, ELSI, che bypassano il problema senza però né curarlo né comprenderlo. La recentissima tecnologia di colture di cellule staminali maschili apre promettenti scenari, ma a tutt¿oggi il processo della spermatogenesi non si può ricostruire in vitro, a causa delle complesse interazioni cellulari; pertanto il `modello animale¿ costituisce l¿unica valida alternativa. Nel mio laboratorio si è generato un modello animale che esprime in modo tessuto/cellula-specifico una forma mutata, funzionalmente inattiva della G-proteina Rap1. Rap1 è coinvolta in eventi differenziativi, embriogenesi, plasticità sinaptica e adesione cellulare. La caratterizzazione fenotipica del nostro topo transgenico mette in risalto la presenza di un blocco spermiogenetico che fa sì che gli spermatidi immaturi vengano rilasciati prematuramente a scapito della non differenziazione in spermatozoi. Questo fenotipo ci fa supporre alterazioni a carico delle giunzioni tra cellule germinali e cellule del Sertoli, le somatiche di supporto.
Noi vogliamo individuare le molecole di adesione espresse dalle cellule germinali la cui funzione è sotto il controllo regolativo di Rap1. E¿ noto che Rap1 in cellule somatiche regola le Integrine associate con citoscheletro di actina e le caderine che compongono le giunzioni aderenti. Verificheremo quindi se questi tipi di molecole sono presenti nelle cellule germinali , considerato che finora le giunzioni germinali-Sertoli sono state studiate essenzialmente a livello morfologico. Per fare ciò, condurremo analisi di RT-PCR utilizzando primers opportunamente disegnati per passare poi a saggi di Western immunoblotting ed infine, identificate le molecole di adesione, a analisi di immunocitochimica e co-immunoprecipitazione secondo tecniche da noi ampiamente collaudate.