La ¿somatopausa¿ è una condizione tipica dell¿anziano caratterizzata da una inferiore produzione di GH e IGF1 imputabile sia ad una diminuzione ipotalamica delle cellule GH secernenti sia ad una modificazione dell¿azione di grelina, peptide dotato di elevata attività GH secernente, e del suo recettore (GHSR). Il GHSR è un recettore specifico associato alle proteine-G, presente in due isoforme: GHSR1a e GHSR1b. Il GHSR1a è presente in stomaco, intestino, pancreas, tiroide, milza, gonadi, miocardio e ghiandole surrenali e in vari tipi di carcinoma umani mentre la forma 1b sembrerebbe essere ubiquitaria. E¿ nostra intenzione approfondire il coinvolgimento di GHSR nella somatopausa utilizzando anticorpi monoclonali (MAb) murini specifici da noi prodotti. Pertanto analizzeremo la sequenza del recettore GHS e sceglieremo sequenze peptidiche posizionate all¿interno del sito di legame con cui saranno immunizzati gli animali i cui splenociti verranno poi utilizzati per la fusione cellulare. Dopo aver selezionato i cloni secernenti anticorpi specifici per i peptidi, la caratterizzazione dei MAb sarà effettuata con test immunoenzimatico e in immunofluorescenza, utilizzando sia cellule HEK 293 ¿wild type¿ che transfettate con il recettore GHS. Poiché gli anticorpi prodotti potrebbero sia mimare l¿azione del ligando attivando quindi il recettore e determinando la trasduzione del segnale, sia comportarsi da antagonisti del recettore stesso, studieremo la loro attività in test funzionali utilizzando linee cellulari sia primarie (calvaria, osteoblasti umani) che immortalizzate (carcinoma prostatico, osteosarcoma, neuroblastoma). Inoltre poiché il legame dell¿ormone al recettore GHSR1a causa un¿attivazione della cascata intracellulare della fosfolipasi C con aumento del calcio intracellulare e attivazione della proteina chinasi C, valuteremo la mobilizzazione del calcio nei diversi modelli cellulari in presenza degli anticorpi.