Valutazione dell' utilizzo del nitrossido nella terapia farmacologica e cellulare delle distrofie muscolari
Progetto PRESUPPOSTI - Il nitrossido (NO) svolge un ruolo importante nella fisiologia muscolare, regolandone l'attività contrattile ed il bilancio energetico, promuovendo la mitocondriogenesi, proteggendo le miocellule dalla morte per apoptosi e favorendo la fusione di cellule satelliti ai miotubi. Nella distrofia muscolare di Duchenne, parte del danno origina proprio da una ridotta funzione della NO sintasi muscolo-specifica, dovuta alla sua localizzazione ectopica nel citosol per mancanza di un corretto e funzionale complesso distrofina-sarcoglicano. OBIETTIVO - valutare il potenziale terapeutico di NO nella distrofia muscolare. DESCRIZIONE - i) valuteremo la capacità di NO di promuovere il differenziamento di cellule satelliti e staminali e di stimolarne la fusione a mitoubi distrofici. Utilizzeremo colture primarie di cellule satelliti e cellule staminali (mesoangioblasti) di topo, capaci di rigenerare muscolo scheletrico. Come modello sperimentale di distrofia utilizzeremo il topo knockout per alfa-sarcoglicano. Misureremo dopo esposizione a NO l¿indice di fusione, markers biochimici del differenziamento, espressione di geni per microarray, funzionalità mitocondriale, il bilancio energetico muscolare e resistenza al danno citotossico. - ii) valuteremo il ruolo di NO nel migliorare l'efficacia della terapia cellulare con mesoangioblasti iniettando in topi distrofici alimentati con una dieta contenente donatori di NO, mesoangioblasti marcati con coloranti vitali che ne permettano la tracciabilità in vivo. L¿analisi di preparati muscolari mediante immunoistochimica con marcanti appropriati, combinata con saggi di funzionalità in muscoli isolati, permetterà di correlare l'indice di fusione dei mesoangioblasti al muscolo distrofico, l'aspetto istologico e lo stato funzionale del muscolo. Si misureranno anche il recupero di funzionalità muscolare in vivo (attività creatin chinasica serica e test di esercizio prolungato).