STUDIO DEI MECCANISMI ANTI-INFIAMMATORI DELLE MOLECOLE TIOLICHE:INIBIZIONE DEL RILASCIO DI ELASTASI DA NEUTROFILI UMANI
Progetto PREMESSE. In risposta a stimoli esogeni od endogeni le cellule delle vie aeree rilasciano vari mediatori pro-infiammatori che richiamano in loco i neutrofili che, oltre alle specie reattive dell¿ossigeno, rilasciano anche enzimi proteolitici e tra questi l¿elastasi si è dimostrata molto lesiva e viene considerata un fattore importante nello sviluppo dei fenomeni infiammatori delle vie aeree che sono alla base di diffuse patologie quali la BPCO e l¿asma.
SCOPO DELLO STUDIO sarà quello di analizzare la capacità antielastasica di molecole tioliche (Met I dell¿erdosteina, Nac, Mesna), alcune delle quali vengono, peraltro, già impiegate in varie situazioni patologiche respiratorie, ma che non sono mai state indagate per la loro capacità antielastasica.
MATERIALI E METODI. I neutrofili verranno isolati da sangue umano mediante centrifugazione su gradiente di densità (Polymorphprep) e verrà valutata la loro vitalità (Trypan blue) ed il grado di purezza della popolazione. Si procederà quindi a misurare il rilascio di elastasi dai neutrofili stimolati con fMLP, mediante misura spettrofluorimetrica (Spettrofluorimetro Perkin Elmer LS 5) della fluorescenza (380-460) rilasciata dall¿MCA in seguito alla azione dell¿elastasi su un substrato fluorogenico precedentemente inerte. Inoltre si studierà anche la eventuale presenza di una azione diretta mediante la misura degli aloni di elastinolisi su piastre di agarosio caricate con elastina e trattate con elastasi.
UTILITA¿.Il gruppo HS (Nac, Met I , Mesna) ha dimostrato di possedere una utile attività antiossidante, qualora possedesse anche una attività antielastasica si avrebbero valide sinergie terapeutiche anti-infiammatorie. Poiché le concentrazioni usate dei tiolici sotto studio sono quelle presenti nell¿uomo in seguito alle abituali somministrazioni per altri impieghi terapeutici (attività mucolitica), i dati ottenuti avranno una immediata rilevanza clinico-terapeutica e non solo farmacologica.