Studio dell¿espressione genica e proteica nella genesi di malformazioni craniofacciali ed assili indotte da fungicidi azolici in embrioni di roditore ed anfibio
Progetto Gli azoli (derivati del triazolo o dell¿imidazolo) sono antimicotici utilizzati in campo clinico ed agrochimico. La loro attività antimicotica e tossica risiede nella inibizione di enzimi P450. La loro attività teratogena è ascrivibile all¿inibizione degli enzimi della famiglia del P450 Cyp26. I Cyp26 sono espressi nell¿embrione in distretti e in tempi specifici, la loro attività permette il catabolismo dell¿acido retinoico, noto morfogeno per tutti i Vertebrati. Viene prodotto secondo un gradiente spaziale e temporale lungo l¿asse corporeo ed è in grado di scatenare l¿espressione a cascata di geni coinvolti nella specificazione di strutture craniofacciali, assili, degli arti. Tra i geni controllati dall¿acido retinoico di particolare interesse sono i geni Hox (che codificano per fattori trascrizionali che controllano vari eventi morfogenetici) ed i geni che codificano per fattori di crescita (FGF, TGFb, BMP). I geni controllati dall¿acido retinoico sono considerati chiave nell¿evoluzione dell¿articolazione buccale e nella specificazione delle strutture assili nei diversi Vertebrati.
Gli effetti degli azoli sullo sviluppo di anfibi e roditori sono altamente specifici: dopo esposizione nelle prime fasi organogenetiche, si osservano negli embrioni gravi alterazioni dell¿apparato branchiale (da cui derivano le strutture craniofacciali) e gravi malformazioni craniofacciali ed allo scheletro assile in stadi più avanzati dello sviluppo. Tutte le malformazioni osservate sono compatibili con un innalzamento dei livelli di acido retinoico.
Nell¿ottica di un approccio moderno allo studio teratologico, scopo del presente progetto è quello di correlare le malformazioni osservate negli esperimenti precedenti ad alterazioni dell¿espressione genica e proteica utilizzando tecniche di microarray, RT-PCR, differential display proteico, western blot qualitativo e quantitativo, tecniche immunoistochimiche. L¿attività di Cyp26 in presenza di azoli verrà infine saggiata .