La leptina è un ormone prodotto dalle cellule adipose che, inviando segnali a nuclei ipotalamici, regola il bilancio energetico. Recentemente è stato dimostrato che l¿ormone svolge funzioni trofiche durante lo sviluppo dei nuclei ipotalamici. Poiché recettori per la leptina sono espressi anche nella corteccia cerebrale, la leptina potrebbe modulare i fenomeni di plasticità sinaptica cerebrale correlati con le funzioni cognitive.
Abbiamo recentemente osservato che, tramite l¿attivazione di segnali che convergono nell¿inibizione di GSK3ß, la leptina interviene nella regolazione della morfogenesi dei coni di crescita assonali dei neuroni ricavati dalla corteccia cerebrale di embrioni di topo (Valerio et al., J Biol Chem 281: 12950-8, 2006).
Obiettivo del nostro attuale progetto sarà quello di analizzare il pattern di modulazione dell¿espressione genica modulato dalla leptina nei neuroni corticali murini. L¿analisi dell¿espressione genica sarà effettuata con GeneChips (Affymetrix). Dopo la stimolazione delle cellule per diversi periodi di tempo, l¿RNA totale sarà preparato col metodo RNeasy Mini Kit (Qiagen). La marcatura ed il trattamento dei campioni sarà effettuata come descritto (Locati et al., J Immunol 168: 3557-62, 2001). L¿analisi dei dati di espressione genica sarà effettuata in collaborazione con esperti in biostatistica seguento criteri predefiniti (Valerio et al., J Neurosci Res 78: 371-82, 2004). I valori ricavati dai chip Affymetrix saranno elaborati mediante l'algoritmo MAS5, al fine di eliminare l'effetto del background e normalizzare gli arrays stessi. Sarà quindi condotta una analisi della varianza con l¿applicazione di metodiche di tipo bayesiano. Un pannello di geni sarà selezionato per essere oggetto di ulteriori studi, previa conferma della loro espressione differenziale con metodiche sperimentali indipendenti (Real-time RT-PCR e/o Western blotting).