La Na sensibilita' interessa circa il 50% degli ipertesi e il 20% dei normotesi. E' un predittore indipendente di complicanze cardiache, renali, vascolari.
1) l¿allele 460Trp di ¿-adducina si associa ad ipertensione Na sensibile e danno d¿organo, 2) le proteine SOD1 e PRDX1 (enzimi del pathway cellulare antiossidante) sono significativamente piu' espresse in fibroblasti umani esprimenti l'allele 460Trp, 3) SOD1 mRNA tende ad essere aumentato in presenza dell'allele 460Trp , PRDX1 mRNA non e' diverso, 4) [ROS]i
significativamente aumentati in presenza dell'allele 460Trp.
La NADPH ossidasi e' responsabile della produzione di ROS.
Presenta subunita' di membrana e citosoliche; queste ultime attivano il sistema traslocando sulla membrana in seguito a stimoli.
Step chiave nell'attivazione e' la fosforilazione e traslocazione della subunita' p47phox dal citosol alla membrana dove si associa a p22phox.
Nelle cellule endoteliali e vascolari muscolari lisce l'attivazione della NADPH ossidasi ha un ruolo chiave nell'attivazione AngioII mediata dei processi di proliferazione e deposizione di matrice. E' documentato un ruolo dei processi infiammatori nello sviluppo e patogenesi dell'ipertensione. Le citochine IL-1 e TNF stimolano maturazione, differenziamento e crescita di molti tipi cellulari coinvolti nell'infiammazione. I fibroblasti umani in cultura aumentano i ROS in seguito a stimolazione con IL-1 e TNF.
Scopo del progetto:
1) valutare l'espressione di membrana di p47phox in presenza dell'allele 460Gly o 460Trp, sia in condizioni basali che dopo stimolo con AngioII, IL-1, TNF: immunoblot su cellule lisate e frazionate (frazione citoscheletrica Triton insolubile, frazione citosolica Triton solubile).
2) determinare attivita' di NADPH ossidasi e [ROS]i nelle stesse condizioni: in chemiluminescenza utilizzando lucigenina come probe.