STUDIO DELLA PERDITA PREFERENZIALE DI UN CROMOSOMA X NELLE PAZIENTI AFFETTE DA CIRROSI BILIARE PRIMITIVA
Progetto La cirrosi biliare primitiva (CBP) è una malattia colestatica cronica a patogenesi autoimmune ed eziologia sconosciuta che colpisce prevalentemente il sesso femminile attraverso meccanismi ad oggi poco noti. Come testimoniato dall¿elevata concordanza nei gemelli monozigoti, la suscettibilita¿ genetica ha un ruolo importante nell¿insorgenza della malattia. Il nostro gruppo ha recentemente riportato che le pazienti di sesso femminile affette da CBP presentano una percentuale di cellule ematiche periferiche con un solo cromosoma X (monosomia) significativamente maggiore rispetto a donne sane di pari eta¿ [Invernizzi et al. Lancet 2004]. Questo dato e le osservazioni secondo cui numerosi geni fondamentali per la tolleranza immunologica mappano sul cromosoma X e donne con monosomia X costitutiva (sindrome di Turner) hanno una elevata incidenza di autoimmunita¿ suggeriscono che la prevalenza femminile della CBP possa essere causata da una correlazione con geni X-linked. A questo proposito, ipotizziamo che la perdita del cromosoma X nei leucociti periferici in corso di CBP non sia random ma colpisca piu¿ frequentemente lo stesso cromosoma (ossia della stessa origine parentale). Secondo questa teoria, l¿insorgenza della CBP o la perdita della tolleranza immunologica periferica o tessuto-specifica sarebbe secondaria all¿espressione (o silenziamento) di uno specifico gene X-linked ereditato da uno dei genitori causata dalla perdita preferenziale di un cromosoma.
Scopo del nostro studio e¿ verificare, mediante l¿uso di marcatori specifici per alleli del cromosoma X, se la perdita di uno dei due cromosomi nei leucociti di donne con CBP avvenga preferenzialmente.
Verranno utilizzati campioni di DNA genomico di 200 donne con CBP, 50 donne con epatite cronica C e 50 donne sane. Le pazienti ed i controlli sono gia¿ stati identificati attraverso l¿ambulatorio di epatologia dell¿Ospedale San Paolo di Milano; per ogni soggetto e¿ gia¿ stata analizzata la prevalenza di cellule monosomiche nel sangue periferico.
Lo studio della perdita preferenziale di un cromosoma X avverra¿ mediante l¿analisi di 4 polimorfismi X-linked [recettore per gli androgeni STR, DXS8105 (Xp22.33), DXS996 ( Xp22.31) e P39 (Xq28)] con PCR multipla a quantificazione di fluorescenza (QF-PCR). Tutti I prodotti di amplificazione verranno poi corsi con elettroforesei capillare su sequenziatore ABI Prism 310 ed analizzate con software GeneScan.