STUDI IN VITRO SU COLTURE PRIMARE DI OSTEOBLASTI UMANI PROVENIENTI DA INDIVIDUI DI DIFFERENTI ETA¿, TRATTATE CON FATTORI DI CRESCITA DEL PLASMA ARRICCHITO DI PIASTRINE

Presupposti: molti fattori di crescita (GF) contenuti nel plasma arricchito di piastrine (PRP), tra cui il PDGF e il TFG-beta, sono stimolatori naturali agenti da regolatori della proliferazione e differenziazione di osteoblasti e sintesi di matrice extracellulare. Il PDGF (platelet derived growth factor) stimola, nel sito della riparazione ossea, la proliferazione di cellule staminali e la loro differenziazione e maturazione ad osteoblasti. I TGF-beta (transforming growth factor) attivano i fibroblasti e i pre-osteoblasti che differenziano a osteoblasti maturi. A differenza delle BMP (bone morphogenetic protein) che inducono osteogenesi anche in siti ectopici, il TGF-beta è in grado di indurre osteogenesi se posto a stretto contatto con tessuto osseo. Favorisce la formazione di matrice, ma inibisce la mineralizzazione, per cui, una volta svolta la funzione di promotore, deve essere rimosso. A partire dal 3° giorno i fibroblasti sostituiscono le piastrine nella produzione di GF. Non è dimostrato che il PRP contenga BMP: esso non possiede pertanto proprietà osteoinduttive intrinseche. Ha quindi bisogno di essere associato a trapianto di tessuto osseo autologo contenente cellule osteoprogenitrici,cioè osso particolato. Descrizione: da materiale osseo prelevato in sede chirurgica, vengono allestite colture primarie di osteoblasti. Il materiale proviene da pazienti di diverso sesso ed età, i quali forniranno anche modeste quantità di sangue per la preparazione di PRP autologo. Sulle colture primarie, che hanno una durata limitata al massimo a tre-quattro settimane, verranno eseguiti i test di proliferazione, differenziazione cellulare e sintesi di matrice, sia in presenza che in assenza di PRP. Dopo caratterizzazione delle cellule in colture con marker di differenziazione specifici (osteopontina o osteonectina), verrà valutata, per via immunoistochimica e immunofluorescenza, la produzione di PDGF e di TGF-beta da parte delle colture trattate con PRP. Obiettivo: 1) documentare le possibili variazioni nella produzione di fattori di crescita (PDGF e di TGF-beta) da parte di PRP autologhi, provenienti da individui di diverso sesso ed età, su colture primarie di osteoblasti umani. 2) Documentare l¿influenza di PRP autologhi, eterologhi e sintetici, sulle colture primarie di osteoblasti umani, provenienti da individui di diverso sesso ed età.