IMMUNO-AFFINITY CAPTURE AND RELEASE OF EXTRACELLULAR VESICLES AND THEIR CHARACTERIZATION AS NOVEL DIAGNOSTIC TOOLS
Tesi di Dottorato
Data di Pubblicazione:
2022
Citazione:
IMMUNO-AFFINITY CAPTURE AND RELEASE OF EXTRACELLULAR VESICLES AND THEIR CHARACTERIZATION AS NOVEL DIAGNOSTIC TOOLS / D. Brambilla ; tutor: M. Chiari ; co-tutor: M. Carini ; coordinatore: G. Aldini. Dipartimento di Scienze Farmaceutiche, 2022 Jan 13. 34. ciclo, Anno Accademico 2021.
Abstract:
Il termine vescicole extracellulari (EVs) indica una popolazione eterogenea di vescicole circondate da membrane che vengono secrete nei fluidi biologici ad opera delle cellule. Recenti scoperte hanno dimostrato il loro ruolo nella comunicazione tra cellule in condizioni fisiologiche ma anche patologiche. Negli ultimi anni le EVs sono state analizzate come potenziali biomarcatori da utilizzare biopsia liquida. Sfortunatamente, lo stato dell’arte a riguardo della loro separazione da fluidi biologici e della loro detection è ben lontano dall’essere ottimale, delineando un urgente bisogno di sviluppo.
L’obiettivo principale di questo progetto di dottorato è lo sviluppo di tecniche di cattura immuno-selettiva reversibile, al fine di separare le EVs da fluidi corporei complessi. Sul mercato sono attualmente disponibili molti kit che permettono una separazione di EVs tramite anticorpi. Tuttavia questi kit presentano numerosi svantaggi che limitano il loro impiego. Il principale è rappresentato dalla difficoltà nel rilasciare una vescicola dopo che è stata catturata da un anticorpo: l’interazione tra un anticorpo e il suo target biologico è infatti difficile da rompere, e solitamente richiede l’utilizzo di condizioni drastiche come soluzioni tampone con basso pH o alta forza ionica, spesso da usare in combinazione a detergenti. Sfortunatamente tutte queste condizioni causano il danneggiamento o la rottura delle vescicole extracellulari, impedendo la loro caratterizzazione tramite tecniche di imaging, che richiedono la presenza di vescicole intatte.
Un nuovo approccio è descritto e sviluppato all’interno di questa tesi di dottorato: normalmente le tecniche di immuno-separazione richiedono la presenza di anticorpi covalentemente immobilizzati su superfici solide, dove possono catturare il loro target biologico. In questa tesi invece due diverse strategie di immobilizzazione reversibile di anticorpi sulla superficie sono proposte e sviluppate. Sfruttando queste strategie le EVs possono essere rilasciate dalla superficie staccando l’anticorpo dalla stessa in condizioni compatibile con l’integrità delle vescicole.
Tipologia IRIS:
Tesi di dottorato
Elenco autori:
D. Brambilla
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