Data di Pubblicazione:
2019
Citazione:
DISSECTING ERAP2 ROLE IN HIV-1 INFECTION / E.m. Lori ; tutor: M. Biasin ; co-tutor: E. James ; coordinatore: R. Ghidoni. DIPARTIMENTO DI SCIENZE BIOMEDICHE E CLINICHE "L. SACCO", 2019 Jan 15. 31. ciclo, Anno Accademico 2018. [10.13130/lori-elisa-maria_phd2019-01-15].
Abstract:
Introduzione: La risposta immunitaria contro HIV è composita e complessa: entrano in gioco molti fattori appartenenti sia al virus che all’ospite e le variabili interindividuali non sono trascurabili e agiscono su vari livelli. Molti studi sono stati condotti per valutare l’influenza che questi diversi fattori possono esercitare sull’infezione da HIV-1 e sulla progressione della malattia e particolare interesse è stato rivolto all’identificazione di fattori genetici in grado di modulare la suscettibilità all’infezione da HIV. Questo orientamento ha portato alla elaborazione del concetto di “vantaggio immunologico” che sembra contraddistinguere la naturale resistenza ad HIV riscontrata in individui HIV-esposti sieronegativi (HESN). In particolare, in questi soggetti tale resistenza è stata correlata a diversi polimorfismi genetici (SNPs) in geni che esercitano un ruolo nell’organizzazione e funzionamento del sistema immunitario (es. ERAP2, APOBEC3H, MX2 e TLR3). Tuttavia, l’eventuale coinvolgimento di questi SNP in pazienti sieropositivi sottoposti ad una terapia antiretrovirale combinata (cART) non è mai stato investigato. Tra i geni “protettivi” menzionati sopra, Endoplasmic Reticulum Aminopeptidase 2 (ERAP2) è un enzima coinvolto nel processo di presentazione antigenica, infatti, taglia le estremità amino terminali di precursori peptidici adattandoli alla corretta lunghezza per il legame con la tasca delle molecole HLA di classe I. Splicing alternativi aplotipo-specifici sul gene di ERAP2 originano sia un trascritto alternativo (Hap B) sia un trascritto definito full-lenght (Hap A). E’ Interessante osservare che la frequenza di quest’ultimo risulta maggiore in individui HESN e, inoltre, la presenza dell’aplotipo A è stata correlata alla naturale resistenza all’ infezione da HIV in vitro. Infine, recentemente, è stata discussa la possibilità dell’esistenza di una localizzazione di ERAP2 alternativa da quella consueta a livello del reticolo endoplasmatico.
Alla luce di queste osservazioni il progetto di ricerca si propone di: 1) approfondire la correlazione tra aplotipi di ERAP2 e la suscettibilità in vitro al virus dell’HIV-1; 2) investigare il ruolo di varianti genetiche associate ad ERAP2 in rapporto alla progressione dell’infezione virale in pazienti sieropositivi riceventi terapia cART; ed 3) esaminare il meccanismo molecolare attraverso il quale Hap A e Hap B mediano la produzione di peptidi destinati alla presentazione antigenica e, di conseguenza, la risultante risposta immunitaria mediata da linfociti T CD8+.
Metodi: Per investigare il ruolo svolto da SNP definiti “protettivi” in risposta alla cART sono stati arruolati 300 pazienti provenienti dalla corte italiana ICONA, riceventi per la prima volta la terapia HAART, sui quali sono state condotte analisi per genotipizzare le varianti resistenti sui geni codificanti ERAP2, TLR3, APOBEC3H e MX2. Periodicamente (basale, 6 mesi ed 1 anno dall’inizio della terapia cART) sono stati raccolti i parametri clinici dei pazienti (genere, conta cellulare CD4/CD8, carica virale (VL), terapia, anno di infezione, evoluzione clinica) e, successivamente, analizzati per identificare una possibile correlazione con le varianti genetiche citate in precedenza.
In parallelo, per approfondire il ruolo rivestito da ERAP2 nella suscettibilità in vitro a HIV-1, PBMCs, isolate da 30 donatori sani (HC) suddivisi in funzione del loro genotipo per ERAP2, sono state infettate in vitro con HIV-1Ba-L in presenza/assenza di ERAP2 ricombinante (rh) (100ng/mL) o in presenza/assenza di DG013A (100 nM/mL), un inibitore di ERAP2. In seguito le culture cellulari sono state analizzate per valutare: 1) la suscettibilità all’ infezione da HIV-1 (saggio E
Tipologia IRIS:
Tesi di dottorato
Keywords:
HIV infection; ERAP2; SNP; HAART; ANTIGEN PRESENTATION
Elenco autori:
E.M. Lori
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